Procedimiento para el aislamiento y crecimiento de bacterias capaces de utilizar el manitol como fuente de carbono.
La presente invención se refiere a un procedimiento para aislar y hacer crecer bacterias de la Familia Rhizobiaceae presentes en cualquier tipo de muestras.
El procedimiento según la presente invención es susceptible de ser aplicado en el aislamiento de bacterias de la Familia Rhizobiaceae y cualquier otra bacteria capaz de utilizar el manitol como fuente de carbono, en cualquier tipo de muestras ya sean de procedencia humana, animal, vegetal, industrial o medioambiental, siendo utilizable por lo tanto en todos los centros de estudio, diagnóstico, análisis o investigación que trabajan o pueden aislar este tipo de bacterias.
Actualmente estas bacterias se aislan en diferentes medios de cultivo cuyo nexo de unión es la presencia de manitol como fuente de carbono aunque no exclusivamente, pero cuyas composiciones en cuanto al resto de los componentes es muy diversa y muchas veces no permite el correcto crecimiento de todos los microorganismos de estos grupos por carecer de algunos nutrientes, lo que hace que se recurra a la utilización de medios complejos de preparación.
La presente invención solventa ese problema incluyendo en el medio de cultivo todos los componentes esenciales necesarios para que puedan crecer todas las especies descritas en la Familia Rhizobiaceae y que también puede ser utilizado para el crecimiento de otras especies que utilicen el manitol como fuente de carbono.
Por lo tanto, la invención proporciona un procedimiento para aislar y crecer bacterias de la Familia Rhizobiaceae presentes en cualquier tipo de muestras y que utilizan manitol como fuente de carbono caracterizado porque comprende las etapas de:
(i) Sembrar un medio de cultivo que incluye: manitol, fosfato monopotásico, fosfato dipotásico, extracto de levadura, triptona, sales minerales, vitaminas, bien con una suspensión densa de la muestra o bien directamente con la propia muestra o con una colonia bacteriana aislada de dicha muestra; y
(ii) incubar el medio de cultivo así sembrado a la temperatura óptima de crecimiento para cada cepa bacteriana a estudiar.
Concretamente, el procedimiento de la invención es aplicable al aislamiento y al crecimiento de las siguientes bacterias:
- Rizobios: Rhizobium, Mesorhizobium, Sinorhizobium, Azorhizobium, Alorhizobium, Bradyrhizobium y, en general, todas las bacterias que forman nódulos en las raíces de plantas.
- Aarobacterias: Agrobacterium y, en general, todas las bacterias capaces de formar tumores en plantas.
- Filobacterias: Phyllobacterium y, en general, todas las bacterias capaces de formar nódulos en las hojas de plantas.
- Azobacterias: Azotobacter, Derxia, Beyerinckia y, en general, todas las bacterias fijadoras de nitrógeno que sean capaces de utilizar el manitol como fuente de carbono.
Igualmente, el procedimiento de la invención es aplicable al crecimiento de las siguientes bacterias:
- Pseudomonas: Pseudomonas, Ralstonia, Burckolderiav, en general, todas las bacterias capaces Gram negativas aerobias capaces de utilizar el manitol como fuente de carbono,
- Corinebacterias: Clavibacter y, en general, todas los Bacilos Gram positivos no esporulados que sean capaces de utilizar el manitol como fuente de carbono.
- Bacilos esporulados: Bacillus y, en general, todos los bacilos Gram positivos esporulados que sean capaces de utilizar el manitol como fuente de carbono.
- Estafilococos: Staphylococcus aureus y, en general, todos los cocos Gram positivos que sean capaces de utilizar el manitol como fuente de carbono.
- Levaduras: todas las levaduras que sean capaces de utilizar el manitol como fuente de carbono.
De acuerdo con la invención, el medio de cultivo comprende los siguientes componentes en las siguientes proporciones
| - Manitol como fuente de | |
| carbono | 0,7-1 % |
| - Fosfato monopotásico | 0,01-0,02 % |
| - Fosfato dipostásico | 0,005-0,01 % |
| - Extracto de levadura | 0,2-0,4 % |
| - Triptona | 0,1-0,2 % |
| - Sales minerales | < 0,01 % |
| - Vitaminas | < 0,01 % |
Para facilitar el crecimiento se utilizarán vitaminas predominantemente grupo B, pantotenato y ácido nicotínico. Asimismo se añadirán soluciones de sales minerales en cantidades traza que aportan potasio, fósforo, magnesio, calcio, cloruros, sodio, sulfatos, cobre, manganeso, zinc, cobalto, molibdeno y/o boro.
Cuando se trate de medios sólidos se añadirá agar al 1,5-2,5 %.
Por último se indica que el medio de cultivo utilizado en el procedimiento de la invención puede presentarse en placas Petri, tubos, microtubos. microplacas o cualquier otro soporte miniaturizado o no.
A continuación, la invención es ilustrada por el siguiente ejemplo no limitativo.
Ejemplo 1
Se procede al aislamiento de rizobios a partir de nódulos presentes en raíces de leguminosas, dichos nódulos se esterilizan en superficie y se machacan con una varilla de vidrio estéril sobre una gota de agua estéril. Con la misma varilla se efectúa la siembra de acuerdo a las especificaciones de la patente, teniendo en cuenta que los microorganismos obtenidos a partir de la muestra requieren la utilización de placas de Petri con medio sólido, por lo que se añade a dicho medio de cultivo agar al 1,5-2,5 %. Sembradas las placas, se incuban durante varios días a 28ºC. A continuación se coge una colonia aislada y se vuelve a sembrar en el mismo medio de cultivo, las colo- nias de rizobios en este medio sólido son mucosas y blanquecinas.
