Derivados de policétidos prenilados y su aplicación para el tratamiento de enfermedades infecciosas.
La presente invención describe una familia de compuestos que son policétidos prenilados de origen natural que poseen una actividad antimicrobiana, particularmente contra bacterias gram positivas, por lo que son útiles para la fabricación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades infecciosas de origen bacteriano.
ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
El progresivo incremento de infecciones bacterianas causado por cepas resistentes a múltiples antibióticos y por estirpes altamente virulentas se ha convertido en uno de los problemas sanitarios más graves en los pacientes hospitalizados. La presión selectiva resultante del uso extensivo de antibióticos durante los últimos 25 años ha llevado al surgimiento de multitud de resistencias bacterianas y a la diseminación de genes de resistencia entre microorganismos patogénicos. Todo ello ha provocado que nos encontremos ante el riesgo de sufrir infecciones quot;intratablesquot;. La creciente aparición y diseminación de resistencias en bacterias Gram-positivas como los géneros Enterococcus, Staphylococcus o Streptococcus, constituyen claros ejemplos de ello. La constante y rápida dispersión mundial de estirpes microbianas portadoras de múltiples resistencias y de genes de virulencia ha provocado un gran incremento en la morbilidad y la mortalidad provocadas por infecciones hospitalarias, tal y como señalaba ya la OMS en 1999 en su quot;Informe sobre las Enfermedades Infecciosas. Eliminar Obstáculos al Desarrollo Saludablequot; y en 2001 en el documento quot;lnfectíon control programmes to control antímícrobíal resístancequot;.
Actualmente, uno de los ejemplos más dramáticos de esta situación lo constituye la creciente aparición y diseminación de resistencias a antibióticos y de factores de virulencia en Staphylococcus aureus y otros miembros del género Staphylococcus. Los estafilococos son microorganismos ubiquistas, presentes en las vías respiratorias del 30% de los adultos sanos y en la piel de un 20%. Los pacientes y el personal de hospitales presentan porcentajes algo más altos. Sin embargo, múltiples grupos de la población presentan riesgo elevado de sufrir infecciones por estafilococos patogénicos. Es normal el desarrollo de infecciones estafilocócicas entre recién nacidos y sus madres, en pacientes transplantados y en personas afectadas de enfermedades tales como gripe, leucemia, diabetes mellitus, patologías broncopulmonares, etc. Aunque dentro de este género bacteriano, la especie S. aureus es la causal de un mayor número de patogénesis estafilocócicas, diversas especies de Staphylococcus coagulasa negativos (CoNS) han sido asociadas con un número creciente de infecciones adquiridas en hospitales. El uso cada vez más frecuente de procedimientos invasivos, implicando diferentes materiales protésicos, y el alto número de pacientes con bajas defensas han contribuido al incremento dramático de infecciones debidas a CoNS. Este tipo de infecciones es especialmente preocupante en el caso de personas portadoras de catéteres u otros materiales protésicos. Por todo lo dicho, el control y tratamiento de las infecciones causadas por Staphylococcus constituye un tema de relevancia clínica extrema. Además, ya en el siglo XXI, la creciente diseminación de cepas resistentes a meticilina, antibiótico que constituía el agente básico contra tales infecciones, ha complicado enormemente la erradicación de las mismas. Tanto en EE.UU. como en Japón y Europa, hay una frecuencia ascendente de aparición de aislados de S. aureus resistentes a meticilina (MRSA) , especialmente en las unidades de cuidado intensivo de los hospitales, aunque también es creciente la aparición de infecciones adquiridas en la comunidad. Los MRSA son, frecuentemente, resistentes a los antibióticos ~-lactámicos, tales como penicilinas, cefalosporinas y carbapenemos. La resistencia a aminoglicósidos y macrólidos es también habitual. Pocos antibióticos son todavía efectivos contra MRSA. En concreto, la mupirocina y los antibióticos glicopéptidos, principalmente vancomicina, constituyen el tratamiento alternativo normalmente utilizado. Sin embargo, el reciente aislamiento en EEUU de tres cepas de S. aureus con alta resistencia a vancomicina (HVRSA) adquirida de Enterococcus, de múltiples cepas de S. aureus resistentes a niveles intermedios (IVRSA) de vancomicina en distintos países, así como la creciente aparición y diseminación de estafilococos resistentes a mupirocina (MuRSA) hacen que estemos ante una situación de riesgo mundial para la salud pública. Ante tal compromiso, nuevos antibióticos como la linezolida o la daptomicina se están ensayando en clínica, pero poco tiempo tras su introducción van apareciendo resistencias a los mismos. Además, en estas bacterias es cada vez más habitual la dispersión de genes de virulencia, como p.ej. genes codificando toxinas, y de genes de resistencia debido a que muchos de estos genes están codificados en elementos genéticos móviles, como plásmidos conjugados, islas de patogenicidad, fagos, etc. Todo ello hace urgente la optimización de los planes de prevención y control, del tratamiento antibiótico frente a infecciones causadas por estafilococos y del desarrollo de nuevas sustancias antibióticas.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención describe un grupo de compuestos que son derivados policíclicos de floroglucinoles prenilados (compuestos de biosíntesis mixta, ruta de los policétidos y de los terpenos) , de origen natural y semisintético. Estos compuestos presentan actividad antimicrobiana con alta especificidad frente a bacterias gram positivas, incluida la cepa multirresistente Staphylococcus aureus.
En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (1) :
Donde:
R1, R2, R3 y R4 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, O, OH, halógeno, alquilo C1-C12, arilo, O-alquilo C1-C12, OC (O) R, N (R') (Rquot;) ; donde R se selecciona entre alquilo C1-C12, O-alquilo C1-C12, arilo o heteroarilo y R'y Rquot; se seleccionan independientemente entre H o alquilo C1-C12, R5 se selecciona entre O ó NH.
A es un ciclo o heterociclo de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituidos por 1 a 4 sustituyentes que se seleccionan independientemente entre alquilo C1-C6, alquenilo C1-C5, halógeno, OH, NH2, o derivados acilados de ellos.
--------representa un enlace que puede ser sencillo o doble,
o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o estereoisómero del mismo.
El término quot;alquiloquot; se refiere, en la presente invención, a radicales de cadenas hidrocarbonadas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 12 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 6, y que se unen al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, nbutilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo etc. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como alquilo, arilo, halógeno (denominándose haloalquilo) , hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y tioalquilo.
El término quot;ariloquot; se refiere, en la presente invención, a anillos aromáticos sencillos o múltiples, que tienen de entre 5 a 18 eslabones en los que se ha eliminado un protón del anillo. Los grupos arilo son por ejemplo, pero sin limitarse a, fenilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo, fluorenilo o antracilo. Preferiblemente el grupo arilo tiene de 5 a 7 átomos de carbono y más preferiblemente el grupo arilo es un fenilo. Los radicales arilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como alquilo, halógeno, hidroxilo o ácido carboxílico.
El término quot;heteroariloquot; se refiere a un arilo que contiene al menos un átomo distinto de carbono, tales como S, N ó O, formando parte del anillo aromático.
El término quot;alqueniloquot; se refiere a radicales de cadenas hidrocarbonadas de 1 a 12 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 6, que contienen uno o más enlaces carbono-carbono dobles, por ejemplo, vinilo, 1-propenilo, alilo, isoprenilo, 2-butenilo, 1 , 3-butadienilo etc. Los radicales alquenilos pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halo, hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, ciano, carbonilo, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alquiltio.
Preferiblemente, en el compuesto de fórmula (1) A es un ciclo o heterociclo de 6 miembros opcionalmente sustituido por 1 a 4 sustituyentes que se seleccionan entre alquilo C1-C5, alquenilo C1-C6 ó OH.
Más preferiblemente, en el compuesto de fórmula (1) A es un grupo con la siguiente fórmula (11)
Rg
(11)
donde R6 a Rg se seleccionan entre hidrógeno, alquilo C1-C5, alquenilo C1-C6 ó OH ---------representa un enlace que puede ser doble o sencillo.
Aún más preferiblemente, R6 y R7 son metilo y Rs y Rg son hidrógeno.
Preferiblemente, en el compuesto de fórmula (1) A es un ciclo o heterociclo de 5 miembros opcionalmente sustituido por 1 a 4 sustituyentes que se seleccionan 10 entre alquilo C1-C5, alquenilo C1-C6 ó OH.
Más preferiblemente, A es un grupo con la siguiente fórmula (111) :
J)
R10
donde R10 se selecciona entre alquilo C1-C5, alquenilo C1-C6 ó OH. 15 Aún más preferiblemente, R10 es un grupo CH (CH3) =CH2. Preferiblemente, R1 se selecciona entre H o alquilo C1-C6 y más preferiblemente R1 es H ó metilo.
Preferiblemente, R2 se selecciona entre OH, O-alquilo C1-C5, OC (O) -alquilo C1C5. Más preferiblemente, R2 es OH.
25 Más preferiblemente, R2 es OCH3 Más preferiblemente, R2 es OC (O) CH3
Preferiblemente, R3 se selecciona entre OH, =0, O-alquilo C1-C6, OC (O) -alquilo C1-C5.
Más preferiblemente, R3es OH.
Más preferiblemente, R3 es OCH3
Más preferiblemente, R3es =0.
Más preferiblemente, R3 es OC (O) CH3
Preferiblemente, R4 se selecciona entre =0 ó O-alquilo C1-C5.
Más preferiblemente, R4es =0.
Más preferiblemente, R4 es OCH3
Preferiblemente, el compuesto de fórmula (1) se selecciona de la lista que comprende:
• 3-[5, 7-Dihidroxi-2, 2-dimetil-8- (2-metil-butirii) -2H-cromen-6-ilmetil]-6-etil-4hidroxi-5-metil-piran-2-ona.
• 3-[ 4, 6-Di hidroxi-2-isopropenil-7 - (2-metil-butiril) -2, 3-di hidro-benzofuran-5ilmetil]-6-etil-4-hidroxi-5-metil-piran-2-ona
• 6-Etil-4-hidroxi-5-metil-3-[ 4, 5, 7 -tri hidroxi-2, 2-dimetil-8-metil-butiril) cromen-6-ilmetil]-piran-2-ona
• 2-Etil-5-[7-hidroxi-5-metoxi-2, 2-dimetil-8- (2-metil-butirii) -2H-cromen-6ilmetil]-6-metoxi-3-metil-piran-4-ona.
• 6-Etil-3-[7-hidroxi-5-metoxi-2, 2-dimetil-8- (2-metil-butirii) -2H-cromen-6ilmetil]-4-metoxi-5-metil-piran-2-ona
• 3-[5, 7-Dihidroxi-2, 2-dimetil-8- (2-metil-butirii) -2H-cromen-6-ilmetil]-6-etil-2metoxi-5-metil-piran-4-ona.
• 3-[5, 7-Dihidroxi-2, 2-dimetil-8- (2-metil-butiril) -cromen-6-ilmetil]-6-etil-4hidroxi-5-metil-piran-2-ona.
• 6- ( (4-acetoxi-6-etil-5-metil-2-oxo-2H-piran-3-il) metil) -2, 2-dimetil-8- (2metilbutanoii) -2H-cromen-5, 7 -diil di acetato.
• 3-[5, 7-Dihidroxi-2, 2-dimetil-8- (2-metil-butirii) -2H-cromen-6-ilmetil]-6-etil) 4-hidroxi-5-metil-1 H-piridin-2-ona,
o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o estereoisómero del mismo.
Los términos quot;sal farmacéuticamente aceptablequot;, quot;solvatoquot; o quot;estereoisómeroquot; se refiere a cualquier sal farmacéutica, solvato, estereoisómero o cualquier otro compuesto que, siendo administrado a un receptor, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto descripto en el presente documento. Sin embargo se observará que las sales farmacéuticamente inaceptables están también en el ámbito de la invención ya que estas últimas pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. La preparación de sales, estereoisómeros y derivados pueden ser llevadas a cabo por medio de métodos conocidos en la materia.
Por ejemplo, las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos provistos en el presente documento se sintetizan por medio de métodos químicos convencionales a partir de un compuesto de origen que contenga un residuo básico o ácido. Estas sales se preparan generalmente, haciendo reaccionar el ácido libre o la forma base de los compuestos con una cantidad estequiométrica de base o ácido adecuado en agua o un disolvente orgánico o mezcla de ambos. Los medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo en general son de preferencia. Ejemplos de sales de adición de ácido incluyen sales de adición de ácidos minerales tales como, por ejemplo, clorhidrato, bromohidrato, iodohidrato, sulfato, nitrato, fosfato y sales de ácidos orgánicos como por ejemplo acetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartrato, malato, mandelato, metanosulfonato y ptoluenosulfonato. Ejemplos de sales de adición de base incluyen sales inorgánicas, como por ejemplo de sodio, potasio, calcio, amonio, magnesio, aluminio y sales de litio, y sales orgánicas de base, como por ejemplo etilendiamina, etanolamina, N, N-dialquilenetanolamina, trietanolamina, glucamina y sales de aminoácidos básicos.
Los compuestos de la invención pueden presentarse en forma cristalina como compuestos libres o solvatos y se entiende que ambas formas están comprendidas dentro del ámbito de aplicación de la presente invención. Los métodos de solvatación son de conocimiento general en la materia. Los solvatos adecuados son aquellos farmacéuticamente aceptables. En una representación particular, un solvato es un hidrato.
Los compuestos de la presente invención, representados por la fórmula (1) , descrita anteriormente pueden incluir enantiómeros, dependiendo de la presencia de centros quirales en cada C, o isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E) . Los isómeros individuales, enantiómeros o diastereómeros y mezclas de los mismos se incluyen dentro del ámbito de aplicación de la presente invención.
La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula (1) o sales farmacéuticamente aceptables, derivados, profármacos, solvatos o estereoisómero de los mismos junto con un transportador farmacéuticamente aceptable, adyuvante o vehículo para la administración a un paciente. Preferiblemente, dicha composición también comprende otro principio activo con un efecto sinérgico o complementario.
Las composiciones farmacéuticas pueden ser administradas por cualquier vía de administración apropiada, por ejemplo, vía oral, tópica, rectal o parenteral (incluyendo vía subcutánea, intraperitoneal, intradérmica, intramuscular e intravenosa) .
Las formas farmacéuticas adecuadas para la administración oral incluyen cualquier composición sólida (tabletas, pastillas, cápsulas, formas granuladas, etc.) o líquida (soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, etc.) y pueden contener excipientes convencionales conocidos en la materia, tales como agentes de unión, por ejemplo jarabe, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto, o polivinilpirrolidona; agentes de relleno, por ejemplo, lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato cálcico, sorbitol o glicina, lubricantes para la preparación de comprimidos, por ejemplo estearato de magnesio, desgregantes como almidón, polivinilpirrolidona, glicolato sódico de almidón o celulosa microcristalina, o agentes humectantes farmacéuticamente aceptables, tal como laurilsulfato de sodio.
Las composiciones sólidas orales se pueden preparar por métodos convencionales de mezclado, llenado o preparación de comprimidos. Las operaciones repetidas de mezclando se pueden utilizar para distribuir de forma uniforme el principio activo utilizando grandes cantidades de agentes de relleno. Estas operaciones son convencionales en el arte de esta invención. Los comprimidos se pueden preparar, por ejemplo a través de granulación húmeda o seca y pueden ser opcionalmente recubiertos por métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal, particularmente con un recubrimiento entérico.
Las composiciones farmacéuticas también pueden ser adaptadas para la administración parenteral, tal como soluciones estériles, suspensiones o productos liofilizados en forma farmacéutica adecuada. Excipientes adecuados, tales como los agentes a granel, neutralizantes o surfactantes pueden ser mencionados.
Los compuestos o composiciones descriptas en la presente invención pueden ser administrados por cualquier método adecuado, como infusión intravenosa, preparaciones orales y administración intraperitoneal o intravenosa. Sin embargo, la vía de administración preferida dependerá de la condición del paciente. En particular, la administración oral es preferida debido a la comodidad para el paciente y el carácter crónico de las enfermedades que deben ser tratadas.
Para su aplicación terapéutica, los compuestos de fórmula (1) deberán preferentemente encontrarse en forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, por ejemplo los compuestos de fórmula (1) tienen un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los excipientes admitidos y no incluyendo material considerado tóxico a los niveles de dosis normales. Los niveles de pureza de un compuesto de fórmula (1) o sus derivados, preferiblemente excede al 50%, más aún al 70%, e incluso al 90%. En una representación preferente, que supere el 95%.
La cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (1) para ser administrado en general, dependerá, entre otros factores, de la persona que se va a tratar, de la severidad de la enfermedad, de la forma de administración elegida, etc. Por este motivo, las dosis mencionadas en esta invención deben ser consideradas como guías para el especialista en la materia y este último debe ajustar la dosis de acuerdo a las variables mencionadas anteriormente. Sin embargo, un compuesto de fórmula (1) se puede administrar una o más veces al día, por ejemplo, 1, 2, 3 ó 4 veces al día en una cantidad típica total diaria comprendida entre 1 y 200 mg/kg de peso corporal/día , preferiblemente 1-1 O mg/kg de masa corporal/día. De la misma forma un compuesto de fórmula (11) se puede administrar una o más veces al día, por ejemplo, 1, 2, 3 ó 4 veces al día en una cantidad típica total diaria comprendida entre 1 y 200 mg/kg de peso corporal/día, preferiblemente 1-1 O m g/ kg de masa corporal/día.
Los compuestos descritos en esta invención, sus sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros y/o solvatos, así como las composiciones farmacéuticas que los contienen se pueden utilizar junto con otros fármacos adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, ser provistos en forma de una composición separada para su administración simultánea o no, con la composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (1) o un estereoisomero farmacéuticamente aceptable, solvato o sal del mismo.
Otro aspecto de la invención es el uso de un compuesto de fórmula (1) para la fabricación de un medicamento.
Otro aspecto de la invención es el uso de un compuesto de fórmula (1) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección de origen bacteriano. Preferiblemente, si la bacteria causante de la infección es gram positiva. Preferiblemente, si la bacteria se selecciona entre los géneros Staphylococcus, Enterococcus y Streptococcus. Aún más preferiblemente, la bacteria se selecciona entre Staphylococcus aureus y Enterococcus faecalís.
Un último objeto de la invención está formado por compuestos de fórmula (1) o sales farmacéuticamente aceptables, derivados, solvatos o estereoisómeros de los mismos para su uso en el tratamiento del cáncer, enfermedades parasitarias o enfermedades bacterianas o micóticas.
A lo largo de la presente descripción, el término quot;tratamientoquot; se refiere a eliminar, reducir o disminuir la causa o efectos de una enfermedad. Para los propósitos de esta invención, tratamiento incluye, aunque sin quedar limitados a los mismos, aliviar, disminuir o eliminar uno o más síntomas de la enfermedad; reducir del grado de enfermedad, estabilizar (es decir, no empeorar) el estado de la enfermedad, retrasar o ralentizar la progresión de la enfermedad, aliviar o mejorar el estado de la enfermedad y remitir (ya sea total
o parcial) .
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra quot;comprendequot; y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
EJEMPLOS
Obtención de los compuestos de fórmula (1)
A partir de hojas, flores y tallos de Achyroclíne satureíoídes (Lam.) OC se aislaron metabolitos con la estructura general (1) . La estructura de los metabolitos ha sido numerada según metodología comúnmente utilizada en la caracterización de productos naturales, usando nombres comunes propuestos en bibliografía (Giovanni Appendino et al. quot;Arzanol, an Anti-inflammator y and Anti-HIV-1 Phloroglucinol a-Pyrone from Helíchr y sum ítalícum ssp. Mícrophyllumquot;, J. Nat. Prod. 2007, 70, 608-612 -John R. Carney et al. quot;Achyrofuran, a New Antihyperglycemic Dibenzofuran from the South American Medicinal Plant Achyroclíne satureíoídesquot;, J. Nat. Prod. 2002, 65, 203-205) .
Ejemplos 1 y 2
200 g. de flores de A. satureíoídes fueron extraídas con hexano (2L) , a temperatura ambiente durante 72 h. Después de la eliminación del solvente, se obtuvieron 75 g. de extracto. El mismo fue sucesivamente cromatografiado en Sephadex LH-20, sílica gel y TLC preparativa para obtener 206 mg (0, 1%) del compuesto C1; R1, R2, R3 =OH y 84 mg (0, 042%) del compuesto C2. Sus estructuras fueron determinadas por análisis espectroscópico.
Compuesto C1
o OH OH
Cl
Aceite viscoso de color amarillento.
1H-NMR (5, CDCI3) : 10, 60 (1 H; s; OH-4) ; 16, 25 (1 H; s; OH-6) ; 9, 95 (1 H; s; OH
9) ; 6, 69 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H-21 ) ; 5, 43 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H-22) ; 3, 77 (1 H; sext; J = 6, 8 Hz; H-17) ; 3, 67 (1 H; s; H-7a) ; 3, 61 (1 H; s; H-7b) ; 2, 55 (2H; e; J = 7, 5 Hz; H-12) ; 1 , 95 (3H; s; H-14) ; 1, 86 (1 H; m; H-18a) ; 1, 47 (6H; s; H-24, H25) ;1, 42 (1H; m; H-18b) ; 1, 18 (3H; t; J= 7, 5 Hz; H-13) ; 1, 16 (3H; d; J= 6, 6 Hz; H-20) ; 0, 92 (3H; t; J = 7, 0 Hz; H-19) . 13C-NMR (5, CDCI3) : 210, 9 (s, C-16) ;
169, 3 (s, C-15) ; 167, 6 (s, C-9) ; 161, 9 (s, C-4) ; 161, 2 (s, C-11) ; 159, 0 (s, C-6) ; 155, 5 (s, C-2) ; 124, 8 (d, C-22) ; 117, 3 (d, C-21 ) ; 108, 2 (s, C-1 O) ; 106, 0 (s, C-5) ; 104, 4 (s, C-3) ;1 04, 0 (s, C-1 ) ; 102, 0 (s, C-8) ; 78, 2 (s, C-23) ; 45, 7 (d, C-17) ; 27, 8 (e, C-24, C-25) ; 26, 7 (t, C-18) ; 24, 3 (t, C-12) ; 17, 4 (t, C-7) ; 16, 7 (e, C-20) ; 11, 9 (e, C-19) ; 11, 6 (e, C-13) ; 9, 4 (e, C-14) . EIMS m/z (%) : 442 (M+, 41) ; 276 (31) ;
261 (1 00) ; 231 (17) ; 219 (78) ; 155 (25) . HREIMS: 442, 2006 (calcd para C2sH3ºÜ7 [M]+, 442, 1992) . IR Vmax: 3216, 2972, 2935, 2876, 1776, 1726, 1664, 1593, 1463, 1424, 1360, 1137, 1035, 912, 783 cm-1. UV (EtOH) Amax (log E) :
343 (2, 05) ; 244 (2, 47) nm. [a]0 = + 14, 8 (e 0, 013; CHCI3) .
o OH OH
C2
Compuesto C2
Aceite viscoso de color amarillento. 1H-NMR (6, CDCb) : 14, 0 (1H; s; OH-6) ; 10, 37 (1H; s; OH-4) ; 8, 5 (1H; sa; OH9) ; 5, 40 (1 H; t; J = 8, 6 Hz; H-22) ; 5, 14 (1 H; s; H-24a) ; 5, 02 (1 H; s; H-24b) ; 3, 93 (1 H; sext; 6, 6 Hz; H-17) ; 3, 59 (2H; sa; H-7) ; 3, 32 (1 H; dd; J =15Hz; H-21 b) ; 3, 0 (1H; dd; J= 15Hz; H-21a) ; 2, 56 (2H; e; J= 7, 5 Hz; H-12) ; 1, 95 (3H; s; H-14) ;
1, 82 (1 H; m; H-18a) ; 1, 77 (3H; s; H-25) ; 1, 40 (1 H; m; H-18b) ; 1, 20 (3H; t; J = 7, 5 Hz; H-13) ; 1, 16 (3H; d; J= 6, 8 Hz; H-20) ; 0, 91 (3H; t; J= 7, 3 Hz; H-19) . 13CNMR (6, CDCI3) : 211, 8 (s, C-16) ; 169, 0 (s, C-15) ; 166, 4 (s, C-9) ; 161 ;9 (s, C-6) ; 161, 4 (s, C-11) ; 160, 5 (s, C-2) ; 159, 8 (s, C-4) ; 142, 3 (s, C-23) ; 114, 1 (t, C-24) ; 107, 9 (s, C-1 O) ; 107, 0 (s, C-5) ; 103, 3 (s, C-1 ) ; 102, 2 (s, C-8) ; 99, 8 (s, C-3) ; 89, 6
(d, C-22) ; 45, 9 (d, C-17) ; 31, 4 (t, C-21) ; 26, 9 (t, C-18) ; 24, 3 (t, C-12) ; 18, 1 (t, C7) ; 16, 7 (e, C-25) ; 16, 6 (e, C-20) ; 11, 9 (e, C-19) ; 11, 5 (e, C-13) ; 9, 4 (e, C-14) . EIMS m/z (%) : 442 (M+, 12) ; 385 (41) ; 273 (25) ; 219 (99) ; 155 (36) . HREIMS: 442, 1994 (calculado para c25H3º07 [M]+, 442, 1992) . IR Vmax: 3343, 2969, 2635, 2878, 177 4, 1725, 1666, 1570, 1432, 1379, 1228, 1138, 898, 799 cm-1.
UV (EtOH) Amax (log E) : 346 (2, 3) ; 243 (2, 29) nm. [a]0 = + 13, 5 (e 0, 014; CHCI3) .
Ejemplo 3
4700 g. de hojas y tallos de A. satureíoídes fueron extraídos con CH2CI2 (30 L) a temperatura ambiente durante 72 h. Después de la eliminación del solvente, se obtuvieron 95 g. de extracto. El mismo fue sucesivamente cromatografiado en Sephadex LH-20, sílica gel y TLC preparative para obtener 206 mg. (0.04%) del compuesto C1, 15, 1 mg. del compuesto C3 (0, 003%) .
Compuesto C3
o OH OH
C3
Aceite viscoso de color amarillento.
1H-NMR (5, CDCb) : 14, 23 (1 H; s; OH-6) ; 10, 58 (1 H; s; OH-4) ; 9, 08 (1 H; s; OH
9) ; 3, 96 (1 H; sext; J = 6, 6 Hz; H-17) ; 3, 89 (1 H; t; J =5, 0 Hz; H-21 ) ; 3, 64 (2H; s;
H-7) ; 2, 92 (1 H; dd; J = 17, 4 Hz; H-22a) ; 2, 68 (1 H; dd; J = 17, 4 Hz; H-22b) ; 2, 57 (2H; e; J = 7, 5 Hz; H-12) ; 1 , 96 (3H; s; H-14) ; 1, 82 (1 H; m; H-18a) ; 1, 47 (6H; s; H-24, H-25) ; 1, 39 (1H; m; H-18b) ; 1, 21 (3H; t; J= 7, 6 Hz; H-13) ; 1, 16 (3H; d; J= 6, 3 Hz; H-20) ; 0, 91 (3H; t; J = 6, 9 Hz; H-19) .13C-NMR (5, CDCb) : 212, 0 (s, C16) ; 169, 3 (s, C-15) ; 167, 2 (s, C-9) ; 163, 3 (s, C-6) ; 161, 5 (s, C-11 ) ; 158, 0 (s, C
4) ; 154, 1 (s, C-2) ; 107, 8 (s, C-10) ; 106, 5 (s, C-5) ; 104, 0 (s, C-3) ; 102, 0 (s, C-8) ; 98, 9 (s, C-1 ) ; 81 , O (s, C-23) ; 68, 9 (d, C-21 ) ; 46, 0 (d, C-17) ; 25, 7 (t, C-22) ; 24, 5 (e, C-24, C-25) ; 24, 3 (t, C-12) ; 17, 7 (t, C-7) ; 26, 7 (t, C-18) ; 16, 7 (e, C-20) ; 11, 9 (e, C-19) ; 11, 5 (e, C-13) ; 9, 4 (e, C-14) . EIMS m/z (%) : 460 (M+, 17) ; 373 (27) ; 293 (26) ; 237 (99) ; 219 (25) ; 155 (27) . HREIMS: 460, 2077 (calcd para C2sH32Üs [M]+, 460, 2097) . IR Vmax: 3441, 2968, 2934, 2877, 1721, 1662, 1624, 1570, 1461, 1425, 1374, 1175, 1126 cm-1.UV (EtOH) Amax (log E) : 341 (2, 52) ; 244 (2, 51) nm. [a]o20 = +5, 9 (e 0, 015; CHCI3) .
25 Ejemplos de preparación de derivados Ejemplo 4 Compuestos C4, CS y C6 Preparación de derivados metoxilados por reacción con diazometano.
A 55 mg (0, 125 m moles) del compuesto C1 disueltos en 4 mi de metanol, se le añadieron 2 mi de disolución 2 M de trimetilsilildiazometano (Me3SiCHN2) en éter etílico. La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta la desaparición del producto de partida (8 horas) . Al cabo de ese tiempo, se evaporó el disolvente y el residuo se purificó por cromatografía en capa fina (CCF) , utilizando AcOEt:Hex 15:85 como eluyente. Como productos de la reacción se obtuvieron 18, 4 mg (31 %) del derivado C4, 6, 6 mg del derivado C5 (11 %) y 4, 5 mg del derivado C6 (8%) .
o OH o C4
Aceite viscoso de color amarillento.
1H-RMN (5, CDCI3) : 6, 5 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H-21 ) ; 5, 5 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H
22) ; 3, 92 (3H, s, OMe) ; 3, 8 (3H, s, OMe) ; 3, 67 (2H; sa; H-7) ; 2, 57 (2H; e; J = 7, 5
Hz; H-12) ; 1, 93 (3H; s; H-14) ; 1, 46 (6H; s; H-24, H-25) ; 1, 23 (3H; t; J = 7, 5 Hz; H-13) ; 3, 55 (1 H; sext; J = 6, 8 Hz; H-17) ; 1, 83 (1 H; m; H-18a) ; 1, 42 (1 H; m; H18b) ; 1, 17 (3H; d; J= 6, 6 Hz; H-20) ; 0, 93 (3H; t; J= 7, 0 Hz; H-19) . 13C-RMN (5, CDCI3) : 210, 4 (s, C-16) ; 181, 1 (s, C-9) ; 162, 7 (s, C-15) ; 161, 5 (s, C-4) ; 159, 4 (s, C-11) ; 159, 3 (s, C-6) ; 153, 1 (s, C-2) ; 125, 8 (d, C-22) ; 117, 8 (d, C-21) ; 117, 7
(s, C-1 O) ; 113, 3 (s, C-5) ; 110, 6 (s, C-1 ) ; 106, 5 (s, C-3) ; 103, 2 (s, C-8) ; 78, 4 (s, C-23) ; 61, 9 (e, OMe) ; 55, 6 (e, OMe) ; 46, 9 (d, C-17) ; 27, 7 (e, C-24, C-25) ; 26, 3 (t, C-18) ; 24, 2 (t, C-12) ; 16, 5 (t, C-7) ; 16, 2 (e, C-20) ; 11, 9 (e, C-19) ; 11, 2 (e, C13) ; 9, 7 (e, C-14) . EM-IE m/z (%) : 470 (M+, 65) ; 455 (49) ; 438 (31 ) ; 289 (37) ; 181 (1 00) ; 113 (51) . EMAR: 470, 2305 (calculado para C27H3407 [Mt,
470, 2285) . IR (cm-1) : 2971, 2935, 2875, 2624, 1775, 1724, 1670, 1662, 1589, 1465, 1429, 1380, 1344, 1266, 1156, 1129, 970. UV (EtOH) Amax (log E) : 342
(2, 37) ; 243 (2, 36) nm. [a] 0 = -8, 0 (e 0, 003; CHCI3) .
es Aceite viscoso de color amarillento.
1H-RMN (5, CDCI3) : 6, 5 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H-21 ) ; 5, 5 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H22) ; 3, 91 (3H, s, OMe) ; 3, 87 (3H, s, OMe) ; 3, 73 (1 H; sext; J = 6, 8 Hz; H-17) ; 3, 6 (2H; sa; H-7) ; 2, 53 (2H; e; J= 7, 5 Hz; H-12) ; 1, 92 (3H; s; H-14) ; 1, 84 (1H; m; H-18a) ; 1, 5 (6H; s; H-24, H-25) ; 1, 41 (1H; m; H-18b) ; 1, 21 (3H; t; J= 7, 5 Hz; H13) ; 1, 18 (3H; d; J = 6, 6 Hz; H-20) ; 0, 93 (3H; t; J = 7, 0 Hz; H-19) . 13C-RMN (5,
CDCI3) : 211, 2 (s, C-16) ; 168, 2 (s, C-15) ; 165, 5 (s, C-9) ; 163, 7 (s, C-4) ; 160, 8 (s, C-6) ; 160, 5 (s, C-11) ; 154, 6 (s, C-2) ; 125, 4 (d, C-22) ; 117, 8 (d, C-21) ; 113, 9 (s, C-1 O) ; 113, 1 (s, C-5) ; 108, 4 (s, C-8) ; 107, 8 (s, C-3) ;1 06, 3 (s, C-1 ) ; 77, 5 (s, C-23) ; 62, 3 (e, OMe) ; 55, 9 (e, OMe) ; 46, 3 (d, C-17) ; 27, 6 (e, C-24, C-25) ; 26, 7 (t, C-18) ; 24, 4 (t, C-12) ; 18, 5 (t, C-7) ; 16, 7 (e, C-20) ; 11, 9 (e, C-19) ; 11, 6 (e, C
13) ; 9, 9 (e, C-14) . EM-IE m/z (%) : 470 (M+, 86) ; 455 (64) ; 289 (1 00) ; 245 (89) ; 181 (93) . EMAR: 470, 2282 (calculado para C27H340 7 [Mt, 470, 2305) . IR (cm-1) : 2971, 2936, 2876, 1714, 1642, 1592, 1566, 1460, 1413, 1367, 1285, 1237,
1135. UV (EtOH) Amax (log E) : 243 (2, 42) nm. [a] 0 = +9, 2 (e 0, 0026; CHCI3) .
o OH o C6
Aceite viscoso de color amarillento. 1H-RMN (5, CDCI3) : 6, 7 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H-21 ) ; 5, 4 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H22) ; 4, 08 (3H, s, OMe) ; 3, 88 (1 H; sext; J = 6, 8 Hz; H-17) ; 3, 67 (2H; sa; H-7) ; 2, 65 (2H; e; J = 7, 5 Hz; H-12) ; 1, 97 (3H; s; H-14) ; 1, 82 (1H; m; H-18a) ; 1, 47 (6H; s; H-24, H-25) ; 1, 41 (1H; m; H-18b) ; 1, 25 (3H; t; J= 7, 5 Hz; H-13) ; 1, 17 (3H; d; J = 6, 6 Hz; H-20) ; 0, 92 (3H; t; J = 7, 0 Hz; H-19) . 13C-RMN (5, CDCI3) : 210 (s, C-16) ; 182, 9 (s, C-9) ; 164, 7 (s, C-15) ; 163, 8 (s, C-4) ; 160, 7 (s, C-11) ; 159, 7 (s, C-6) ; 155, 1 (s, C-2) ; 123, 7 (d, C-22) ; 118, 1 (s, C-10) ; 117, 5 (d, C-21) ; 106, 3 (s, C-5) ; 103, 2 (s, C-3) ;104, 7 (s, C-1) ; 103, 5 (s, C-8) ; 77, 6 (s, C-23) ; ) ; 56 (e, OMe) ; 45, 8 (d, C-17) ; 27, 7 (e, C-24, C-25) ; 26, 8 (t, C-18) ; 24, 2 (t, C-12) ; 16, 9 (t, C-7) ; 16, 2 (e, C-20) ; 12 (e, C-19) ; 11, 2 (e, C-13) ; 9, 6 (e, C-14) . EM-IE m/z (%) : 442 (M+, 41) ; 276 (31) ; 261 (100) ; 231 (17) ; 219 (78) ; 155 (25) . EMAR: 456, 2148 (calculado para C26H320 7 [Mt, 456, 2133) . IR (cm-1) : 2969, 2931, 2875, 1776, 1729, 1660, 1599, 1543, 1466, 1431, 1379, 1283, 1188, 1161,
1130. UV (EtOH) Amax (log t) : 357 (2, 43) ; 317 (2, 41) ; 245 (2, 42) nm. [a]0 =
+10, 0 (e 0, 003; CHCI3) .
Ejemplo 5 Compuesto C7
Preparación del derivado C7 por reacción de hidrogenación.
21, 1 mg (0, 048 m moles) del compuesto C1 se disolvieron en 4 mi de tetrahidrofurano seco (THF) y se adicionó una punta de espátula de Pd/C al 1 0%. Se conectó al balón de reacción un globo lleno de H2 y el sistema se cerró bajo esta atmósfera. Se dejó reaccionar durante 21 horas, hasta observar por CCF la desaparición del producto de partida. Al cabo de ese tiempo se filtró la disolución y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó por CCF utilizando AcOEt:Hex 15:85 como eluyente, obteniéndose el derivado C7 en forma cuantitativa. Aceite viscoso de color rojizo.
o OH OH
13) ; 1, 18 (3H; d; J= 6, 6 Hz; H-20) ; 0, 93 (3H; t; J= 7, 0 Hz; H-19) . 13C-RMN (5, CDCI3) : 21 O (s, C-16) ; 169, 3 (s, C-15) ; 167, 6 (s, C-9) ; 161, 4 (s, C-4) ; 161, 2 (s, C-11) ; 161, 1 (s, C-6) ; 155, 8 (s, C-2) ; 108, 2 (s, C-10) ; 105, 3 (s, C-5) ; 104, 4 (s, C-3) ;102, 2 (s, C-1) ; 102, 2 (s, C-8) ; 76, 2 (s, C-23) ; 45, 7 (d, C-17) ; 31, 7 (t, C-22) ; 26, 7 (e, C-24, C-25) ; 26, 7 (t, C-18) ; 24, 3 (t, C-12) ; 17, 4 (t, C-7) ; 16, 9 (t, C-21 ) ;
16, 7 (e, C-20) ; 11, 9 (e, C-19) ; 11, 6 (e, C-13) ; 9, 4 (e, C-14) . EM-IE m/z (%) : 444 (M+, 46) ; 387 (1 00) ; 233 (36) ; 221 (63) ; 155 (35) . EMAR: 444, 2148 (calculado para C25H320 7 [Mt, 442, 2169) . IR (cm-1) : 3171, 2972, 2936, 2876, 1777, 1727, 1665, 1621, 1597, 1570, 1461, 1424, 1370, 1277, 1256, 1159, 1140, 1117,
1037, 784, 741. [a]0 = +11 , 6 (e 0, 008; CHCI3) .
Ejemplo 6
Compuesto C8
Preparación del derivado acilado por reacción de acetilación.
25 46, 5 mg (0, 105 m moles) del compuesto C1 se disolvieron en la mínima cantidad posible de piridina; se adicionaron un par de cristales de 4dimetilaminopiridina (DMAP) y 29, 80 1-11 de anhídrido acético (0, 32 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente hasta la desaparición del
C7
1H-RMN (5, CDCI3) : 16, 27 (1 H; s; OH-4) ; 10, 64 (1 H; s; OH-6) ; 9, 91 (1 H; s; OH9) ; 3, 79 (1 H; sext; J = 6, 8 Hz; H-17) ; 3, 71 (2H; sa; H-7) ; 2, 67 (2H; m; H-21 ) ; 2, 57 (2H; e; J = 7, 5 Hz; H-12) ; 1, 96 (3H; s; H-14) ; 1, 78 (1 H; m; H-18a) ; 1, 4 (1 H; m; H-18b) ; 1, 38 (6H; s; H-24, H-25) ; 1, 38 (2H; m; H-22) ; 1, 20 (3H; t; J = 7, 5 Hz; Hproducto de partida (15 minutos) . Al cabo de ese tiempo, se eliminó el exceso de reactivos a presión reducida y el residuo sólido se purificó por CCF usando AcOEt:Tol 15:85 como eluyente. Se obtuvieron 38, 2 mg (64%) del derivado C8. Aceite viscoso de color amarillento.
o OCOCH 3 OCOCH 3
es 1H-RMN (5, CDCI3) : 6, 13 (1H; d; J= 10, 0 Hz; H-21) ; 5, 63 (1H; d; J= 10, 0 Hz; H-22) ; 3, 45 (2H; sa; H-7) ; 3, 06 (1 H; sext; J = 6, 8 Hz; H-17) ; 2, 54 (2H; e; J = 7, 5 Hz; H-12) ; 2, 20 (9H, s, OCOCH3) ; 1, 81 (1H; m; H-18a) ; 1, 71 (3H; s; H-14) ; 1, 43 (6H; s; H-24, H-25) ; 1, 35 (1H; m; H-18b) ; 1, 21 (3H; t; J= 7, 5 Hz; H-13) ; 1, 13 10 (3H; d; J = 6, 6 Hz; H-20) ; 0, 93 (3H; t; J = 7, 0 Hz; H-19) .13C-RMN (5, CDCI3) : 205, 7 (s, C-16) ; 169, 2 (s, C-15) ; 167, 6 (s, OCOCH3) ; 161, 4 (s, C-11 ) ; 159, 5 (s, C-4) ; 159, 4 (s, C-9) ; 152, 9 (s, C-2) ; 149, 7 (s, C-6) ; 130, 9 (d, C-22) ; 115, 8 (d, C21 ) ; 111, 9 (s, C-1 ) ; 107, 8 (s, C-1 O) ; 106, 3 (s, C-5) ; 104, 3 (s, C-3) ; 103, 2 (s, C8) ; 76, 9 (s, C-23) ; ) ; 47, 9 (d, C-17) ; 27, 9 (e, C-24, C-25) ; 25, 4 (t, C-18) ; 24, 5 (t, 15 C-12) ; 20, 5 (e, OCOCH3) ; 20, 0 (t, C-7) ; 18, 5 (e, C-20) ; 11, 2 (e, C-19) ; 11, 1 (e, C-13) ; 9, 4 (e, C-14) . EM-IE m/z (%) : 468 (M+, 17) ; 525 (1 00) ; 469 (48) ; 426 (56) ; 275 (59) ; 219 (45) ; 155 (52) . IR (cm-1) : 2975, 2938, 2877, 1775, 1713, 1647, 1578, 1460, 1430, 1369, 1287, 1190, 1124, 1105, 1067, 1046, 887. uv (EtOH) Amax (log E) : 341 (1 , 55) ; 241 (1 , 57) ; 204 (1 , 66) nm. [a]o20 = +0.009 (e 0, 017; CHCI3)
Ejemplo 7 Compuesto C9
25 Modificación de la lactona: preparación de la lactama por reacción con acetato amónico.
29, 6 mg (0, 061 m moles) del compuesto C1 y 100 mg (20 equiv) de acetato amónico (CH3C02NH4) se colocaron en un balón. A continuación se añadieron 5 mi de ácido acético y la mezcla se calentó a reflujo. Después de 27 horas no se vio que la reacción evolucionara; posteriormente se eliminó el disolvente a presión reducida y el residuo se purificó por Cromatografía en Capa Fina (CCF) utilizando AcOEt:Hex 15:85 como eluyente, obteniéndose 8 mg (27%) del derivado C9. Aceite viscoso de color amarillo.
o OH OH
25 C9
1H-RMN (5, CDCI3) : 16, 21 (1 H; s; OH-4) ; 10, 62 (1 H; s; OH-6) ; 9, 97 (1 H; s; OH
lO 9) ; 6, 72 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H-21 ) ; 5, 46 (1 H; d; J = 10, 0 Hz; H-22) ; 3, 81 (1 H;
sext; J = 6, 8 Hz; H-17) ; 3, 66 (, 61 (2H; sa; H-7) ; 2, 57 (2H; e; J = 7, 5 Hz; H-12) ;
1, 97 (3H; s; H-14) ; 1, 87 (1H; m; H-18a) ; 1, 49 (6H; s; H-24, H-25) ; 1, 40 (1H; m;
H-18b) ; 1, 21 (3H; t; J= 7, 5 Hz; H-13) ; 1, 16 (3H; d; J= 6, 6 Hz; H-20) ; 0, 95 (3H;
t; J = 7, 0 Hz; H-19) . 13C-RMN (5, CDCI3) : 210, 4 (s, C-16) ; 169, 5 (s, C-15) ;
15 167, 5 (s, C-9) ; 161, 9 (s, C-4) ; 160, 8 (s, C-11) ; 158, 8 (s, C-6) ; 154, 9 (s, C-2) ;
124, 6 (d, C-22) ; 116, 9 (d, C-21 ) ; 107, 1 (s, C-1 O) ; 106, 0 (s, C-5) ; 104, 4 (s, C
3) ;103, 8 (s, C-1) ; 102, 0 (s, C-8) ; 77, 8 (s, C-23) ; 45, 5 (d, C-17) ; 27, 8 (e, C-24, C
25) ; 26, 3 (t, C-18) ; 24, 0 (t, C-12) ; 17, 2 (t, C-7) ; 15, 1 (e, C-20) ; 11, 9 (e, C-19) ;
10, 9 (e, C-13) ; 9, 5 (e, C-14) .
20 EM-IE m/z (%) : 442 (M+, 68) ; 288 (14) ; 275 (100) ; 261 (80) ; 219 (65) . EMAR:
442, 2230 (calculado para C25 H32 N06 [Mt, 442, 2208) . IR (cm-1) : 3181, 2972,
2932, 1740, 1665, 1595, 1463, 1424, 1380, 1361; 1281; 1171, 1138; 1084. uv
(EtOH) Amax (log E) : 359 (2, 85) ; 241 (2, 88) ; 206 (2, 97) nm. [a] 0 20 = -18, 0 (e
0, 001; CHCI3) .
25 Ensayos antimicrobianos
Para la determinación de la MIC50 (la menor concentración que reduce a la mitad el desarrollo bacteriano) , el crecimiento microbiano en microplacas de 96 pocillos fue monitorizado en presencia de entre 6 y 1O concentraciones diferentes (rango entre 1 y 128 micromolar) de los compuestos ensayados; 5 junto con los antibióticos comerciales ampicilina y kanamicina como controles. Para ello, cultivos frescos de bacterias (o levaduras) fueron diluidos a densidades ópticas a 620 nanómetros de 1 o-5 por mililitro (equivalentes a 105 unidades formadoras de colonias por mililitro) ; momento en el que son cultivados de nuevo en presencia de los compuestos ensayados, o los 10 antibióticos control. Las lecturas de crecimiento fueron tomadas después de 24 horas. Entonces, los valores de crecimiento (expresados en densidad óptica a 620 nanómetros) son representados gráficamente frente al logaritmo en base 1O de las concentraciones de los compuestos ensayados. Los puntos de la gráfica así obtenidos, son ajustados a la curva sigmoidea inversa para obtener 15 el valor MIC50 definitivo. Estos ensayos se llevaron a cabo con dos bacterias gram-negativas (Escheríchía colí y Pseudomonas aerugínosa) , dos grampositivas (S. aureus and Enterococcus faecalís) , y la levadura Saccharomyces cerevísíae como modelo eucariota (no bacteriano) . La cepa de E. coli empleada porta un plásmido que le confiere resistencia a la ampicilina. La tabla 1 muestra 20 los valores MIC50 de algunos compuestos ejemplo mencionados en esta invención.
Compuesto E. colí P. aerugínosa S. aureus E. faecalís S. cerevísíae
Productos Naturales C1 gt;gt;100 gt;gt;100 43 ± 18 gt;100 gt;gt;100
C2 gt;gt;100 gt;gt;100 13 ± 4 40 ± 28 gt;gt;100 gt;gt;100
C3 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;100
Derivados semisintéticos C4 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;100
C5 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100
C6 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100
C7 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100
C8 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100 gt;gt;100
C9 gt;gt;100 gt;gt;100 25 ± 21 gt;gt;100 gt;gt;100
Controles Ampicilina gt;gt;100 89 ±55 lt;lt;1 lt;lt;1 NO
Kanamicina lt;lt;1 114 ± 20 lt;lt;1 23 ±4 NO Tabla 1: MIC de productos naturales y derivados semisintéticos (~M)
