- alquenilo C1-C10, y donde el símbolo \overline{\text{- - - - - -}} representa un enlace que puede ser simple o doble,
para la elaboración de un medicamento.
Una realización preferida de este aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de estructura química (I) donde R5 es R'-O-Z siendo R' un metilo para la elaboración de un medicamento.
Uno de los grupos que se encuentran en mayor número de derivados del gambierol es un alquenilo de 7 átomos de carbono en R5 ya que es uno de los elementos que suele estar implicado en la actividad de estas moléculas. Por ello, otra realización preferida de este aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de estructura química (I) donde R5 es un alquenilo de 7 átomos de carbono, para la elaboración de un medicamento.
En el caso del gambierol, R1, R2 y R3 son grupos hidroxilo, mientras que R4 es grupo metilo, R5 es un grupo alquenilo de 7 átomos de carbono, y \overline{\text{- - - - - -}} es un doble enlace. Por ello una realización más preferida de este aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de estructura química (I) donde R1, R2 y R3 son grupos hidroxilo, R4 es grupo metilo, R5 es un grupo alquenilo de 7 átomos de carbono, y \overline{\text{- - - - - -}} es un doble enlace. Este compuesto corresponde con el gambierol, de estructura química (II) .
Por "alquilo" se refiere en la presente invención a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 10 átomos de carbonos, más preferiblemente tienen de 1 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, tert-butilo, sec-butilo, n-pentilo, etc.
Por "alquenilo" se refiere en la presente invención a un radical alquilo que tiene entre 1 y 10 átomo de carbono y que tiene uno o más enlaces insaturados. Los radicales alquenilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como un arilo, halógeno, hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, ciano, carbonilo, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto, etc.
En la presente invención se entiende por "acilo" aquellos grupos derivados de un oxoácido, por ejemplo, aunque sin limitarse un ácido carboxílico, por eliminación de al menos un grupo hidroxilo.
El término "análogo" tal y como aquí se utiliza, se refiere a una sustancia química similar a otra sustancia química en estructura y/o función.
En la presente invención se entiende por "derivado", aquel compuesto que se produce a partir de otro mediante modificaciones del mismo, y que presenta una funcionalidad similar. Estas modificaciones se pueden realizar por ejemplo, aunque sin limitarse, mediante métodos químicos, físicos, microbiológicos o farmacológicos.
El incremento tanto en β-amiloide como en la fosforilación de tau por separado o de forma conjunta, suele estar asociado a un proceso patológico. Estos procesos están relacionados fundamentalmente con el sistema nervioso, ya que su acumulación se da básicamente en neuronas, provocando su degeneración. La principal patología relacionada con estos dos elementos de forma conjunta, es la enfermedad de Alzheimer. Esta enfermedad cursa con incremento en los depósitos de β-amiloide, así como con hiperfosforilación de la proteína tau, lo que da lugar a marañas neurofibrilares que provocan la degeneración progresiva de neuronas y por tanto deterioros cognitivos y motores. Como se demuestra en los ejemplos, el gambierol, es capaz de reducir la sobreexpresión de β-amiloide y la hiperfosforilación de tau, pero no presenta efectos sobre ninguna de estas estructuras sino se encuentran alteradas. Esto indica que estos compuestos son útiles para el tratamiento de patologías relacionadas con el incremento en la expresión de β-amiloide o hiperfosforilación de tau tanto de forma independiente como de forma conjunta. Por ello, una realización preferida de este aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de estructura química (I) ó (II) para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas. En otra realización preferida de este aspecto de la invención, se refiere al uso de un compuesto de estructura química (I) ó (II) para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una patología relacionada con el incremento de β-amiloide y/o hiperfosforilación de tau respecto de un control.
En la presente invención, el término "prevención y/o tratamiento de una patología relacionada con el incremento de la proteína β-amiloide, respecto de un control" se refiere al incremento de la proteína β-amiloide respecto del valor control de concentración de dicha proteína. El valor control de la concentración de la proteína β-amiloide es el valor de dicha proteína en un individuo sano, es decir, un individuo que no presente síntomas de una patología relacionada con la sobreproducción de la proteína β-amiloide, conocida en el estado de la técnica. El valor control de la concentración de la proteína β-amiloide puede ser también el valor basal del mismo individuo que sufre la enfermedad pero cuando está sano. Dicho valor puede ser un valor promedio de los niveles de concentración de dicha proteína en un grupo de individuos sanos. Asimismo, "la hiperfosforilación de la proteína tau, respecto de un control" se refiere una concentración de proteína tau mayor que el valor control de fosforilación de dicha proteína. El valor control de la fosforilación de la proteína tau se determina del mismo modo que se ha descrito para el valor control de la concentración de la proteína β-amiloide. La determinación de la concentración de la proteína β-amiloide y/o la fosforilación de la proteína tau se lleva a cabo en una muestra aislada de un individuo, preferiblemente la muestra es un fluido biológico. Preferiblemente el fluido biológico es líquido cefalo- rraquídeo.
Se entiende por "patología relacionada con el incremento de β-amiloide" en la presente invención todas aquellas patologías que cursan, bien con un incremento en los niveles de la proteína precursora de β-amiloide, o bien con un aumento en el procesamiento anómalo de dicha proteína, aumentando la cantidad insoluble y dando lugar por tanto a un incremento tanto en tamaño como en cantidad, de los depósitos de β-amiloide intra o extracelular. Dentro de estas patologías se encuentran por ejemplo, aunque sin limitarse, esclerosis lateral amiotrófica, síndrome de Down, demencia vascular, angiopatía amiloidea cerebral relacionada con proteínas priónicas y enfermedad de Creutzfeldt-Jacobs. Por esto, una realización preferida de este aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de estructura química (I) ó (II) para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una patología relacionada con el incremento de β-amiloide que se selecciona de la lista que comprende: esclerosis lateral amiotrófica, síndrome de Down, demencia vascular, angiopatía amiloidea cerebral relacionada con proteínas priónicas y enfermedad de Creutzfeldt Jacobs.
Se entiende por "patología relacionada con la hiperfosforilación de tau" en la presente invención, todas aquellas patologías que cursan con un aumento en la expresión de tau, lo que conlleva un aumento en la cantidad de proteína fosforilada, o una hiperfosforilación de dicha proteína, aun sin alteración en la expresión, ya que ambas situaciones conllevan un incremento en el tamaño o número de marañas neurofibrilares producidas por la agregación anómala de tau fosforilada. Dentro de las patologías relacionadas con la hiperfosforilación de tau se encuentran por ejemplo, aunque sin limitarse, demencia frontotemporal, parálisis supranuclear progresiva, demencia asociada a tauopatía sistémica múltiple, degeneración corticobasal, y degeneración lobular frontotemporal o enfermedad de Pick. Por ello, otra realización preferida de este aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de estructura química (I) ó (II) para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una patología relacionada con la hiperfosforilación de tau respecto de un control que se selecciona de la lista que comprende: demencia frontotemporal, parálisis supranuclear progresiva, demencia asociada a tauopatía sistémica múltiple, degeneración corticobasal, y degeneración lobular frontotemporal o enfermedad de Pick.
Por otro lado, existen multitud de otras enfermedades que cursan con alteraciones simultáneas en ambas proteínas además del Alzheimer, como por ejemplo, aunque sin limitarse, trastornos o déficits cognitivos moderados, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis tipo Dutch, angiopatía amiloidea cerebral, demencia asociada a la enfermedad de Parkinson, enfermedad neurodegenerativa por cuerpos de Lewy difusos, degeneración corticobasal, panencefalitis esclerosante subaguda, demencia de gránulos argirófilos y enfermedad familiar de Gerstmann-Straussler-Scheinker. Por esto, otra realización preferida de este aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de estructura química (I) o (II) para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una patología relacionada con el incremento de β-amiloide y hiperfosforilación de tau respecto de un control que se selecciona de la lista que comprende: Alzheimer, trastornos o déficits cognitivos moderados, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis tipo Dutch, angiopatía amiloidea cerebral, demencia asociada a la enfermedad de Parkinson, enfermedad neurodegenerativa por cuerpos de Lewy difusos, degeneración corticobasal, panencefalitis esclerosante subaguda, demencia de gránulos argirófilos y enfermedad familiar de Gerstmann-Straussler-Scheinker.
Se entiende por "trastornos o déficits cognitivos moderados" en la presente invención, aquellas alteraciones de las facultades intelectuales de la persona, entre las que se encuentran, aunque sin limitarse, el deterioro de la orientación, deterioro de la memoria reciente, deterioro del razonamiento, problemas con el cálculo, problemas de lenguaje, alteración de la capacidad de realizar tareas complejas y alteración de la capacidad de programación, que aparecen en estadios iniciales de diferentes enfermedades como por ejemplo, aunque sin limitarse, Alzheimer, esquizofrenia o demencia senil.
Cualquiera de los compuestos de estructura química (I) ó (II) puede formularse junto a otros compuestos para formar parte de una composición farmacéutica. La composición farmacéutica comprende, además de este compuesto un vehículo farmacéuticamente aceptable, otro principio activo, o cualquiera de las combinaciones del compuesto de estructura (I) o (II) con el resto de componentes.
Dicha composición farmacéutica puede formularse para su administración a un animal, y más preferiblemente a un mamífero, incluyendo al hombre, en una variedad de formas conocidas en el estado de la técnica. Así, pueden estar, sin limitarse, en soluciones acuosas o no acuosas, en emulsiones o en suspensiones. Ejemplos de soluciones no acuosas son, por ejemplo, pero sin limitarse, propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, o ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. Ejemplos de soluciones acuosas, son por ejemplo, pero sin limitarse, agua, soluciones alcohólicas en agua, o medios salinos. Las soluciones acuosas pueden estar tamponadas o no, y pueden tener componentes activos o inactivos adicionales. Los componentes adicionales incluyen sales para modular la fuerza iónica, conservantes incluyendo, pero sin limitarse a, agentes antimicrobianos, antioxidantes, quelantes, o similares, o nutrientes, incluyendo glucosa, dextrosa, vitaminas o minerales.
Alternativamente, la composición farmacéutica puede prepararse para su administración en forma sólida. Las composiciones pueden combinarse con varios vehículos o excipientes inertes, incluyendo pero sin limitarse a: aglutinantes, tales como celulosa microcristalina, goma tragacanto, o gelatina; excipientes, tales como almidón o lactosa; agentes dispersantes, tales como ácido algínico o almidón de maíz; lubricantes, tales como estearato de magnesio, deslizantes tales como dióxido de silicio coloidal; agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina; o agentes aromatizantes, tales como menta o salicilato de metilo.
Cualquier composición farmacéutica descrita anteriormente y/o sus formulaciones puede administrarse a un animal, incluyendo un mamífero y, por tanto, al hombre, en una variedad de formas, incluyendo, pero sin limitarse, oral, parenteral, intraperitoneal, intravenosa, intradérmica, epidural, intraespinal, intraestromal, intraarticular, intrasinovial, intratecal, intralesional, intraarterial, intracardíaca, intramuscular, intranasal, intracraneal, subcutánea, intraorbital, intracapsular, tópica, mediante parches transdérmicos, vía rectal, vía vaginal o uretral, mediante la administración de un supositorio, percutánea, spray nasal, implante quirúrgico, pintura quirúrgica interna, bomba de infusión o vía catéter. Una realización preferida de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula química (I) o (II) , donde se administra dicho compuesto por vía oral o intraperitoneal.
La dosificación para obtener una cantidad terapéuticamente efectiva depende de una variedad de factores, como por ejemplo, la edad, peso, sexo o tolerancia, del mamífero. En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de la composición farmacéutica de la invención que produzcan el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de dicha composición farmacéutica y el efecto terapéutico a conseguir.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Las siguientes figuras y ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
Descripción de las figuras
Figura 1. Muestra la disminución en los niveles de expresión de β-amiloide intracelular después del tratamiento con gambierol.
(A) Bandas de western blot en las que se representa la expresión de β amiloide en cultivos neocorticales de animales silvestres (NoTg) , cultivos neocorticales obtenidos a partir de ratones 3xTg-AD (3xTg) y los niveles de péptido β-amiloide en los cultivos neocorticales de ratones 3xTg-AD tratados con gambierol (3xTg+Gamb) , evaluados con el anticuerpo 6E10. La exposición de los cultivos corticales de ratones triple transgénicos a gambierol disminuye la sobreexpresión de β amiloide en este modelo in vitro. (B) La cuantificación de las bandas de western blot muestra una disminución significativa de la sobreexpresión de β-amiloide después del tratamiento con gambierol (*p>0.05 respecto a la expresión de β-amiloide en cultivos transgénicos) .
Figura 2. Muestra una disminución de los niveles de tau fosforilada en cultivos de neuronas transgénicas tratadas con gambierol.
(A) Imágenes de western blot, que muestran los niveles de fosforilación de tau empleando el anticuerpo AT8 (reconoce Tau fosforilada en Ser 202) en cultivos silvestres (NoTg) , cultivos transgénicos (3xTg) y cultivos transgénicos tratados con gambierol (3xTg+Gamb) . (B) La cuantificación de la expresión de tau fosforilada (marcada con el Anticuerpo AT8) , muestra una disminución significativa de la fosforilación de tau en cultivos transgénicos tratados con gambierol (*p<0.05, n=3 obtenida de tres experimentos representativos, cada uno realizado en duplicado) .
Figura 3. Muestra una inhibición de la expresión de tau fosforilada en los residuos Thr212 y Ser 214 (marcada con el anticuerpo AT100) en cultivos de neuronas transgénicas tratadas con gambierol.
(A) Bandas de western blot mostrando la inmunoreactividad para el anticuerpo AT100 en cultivos obtenidos de ratones no transgénicos (NoTg) , cultivos transgénicos (3xTg) y cultivos transgénicos tratados con gambierol (3xTg+Gamb) . (B) La cuantificación de la expresión de tau fosforilada (marcada con el Anticuerpo AT100) , muestra una disminución significativa de la fosforilación de tau en cultivos transgénicos tratados con gambierol (*p<0.05, n=3 obtenida de tres experimentos representativos, cada uno realizado en duplicado) .
Figura 4. Muestra la recta patrón usada para la determinación de la cantidad de péptido β-amiloide extracelular.
Recta patrón obtenida por cuantificación de diversas concentraciones de β-amiloide obtenidas por medición de la absorbancia a una longitud de onda de 495 nm.
Figura 5. Muestra una disminución de los niveles de péptido β-amiloide extracelular.
Estos niveles son determinados mediante la cuantificación la de β-amiloide secretada al medio de cultivo, en cultivos transgénicos tratados con gambierol. Dicha cuantificación muestra una disminución del péptido β-amiloide extracelular en los cultivos triple transgénicos tratados con gambierol frente a los no tratados. NoTg: cultivos control. 3xTg: cultivos de neuronas corticales obtenidas a partir de animales triple transgénicos. 3xTg+Gamb: cultivos de neuronas corticales obtenidas a partir de animales triple transgénicos tratados con gambierol.
Ejemplos Los siguientes ejemplos específicos que se proporcionan en este documento de patente sirven para ilustrar la naturaleza de la presente invención. Estos ejemplos se incluyen solamente con fines ilustrativos y no han de ser interpretados como limitaciones a la invención que aquí se reivindica. Por tanto, los ejemplos descritos más adelante ilustran la invención sin limitar el campo de aplicación de la misma.
Ejemplo 1
Determinación de la viabilidad celular del tratamiento con gambierol
Para la realización de los experimentos de la presente invención se utilizaron bien un modelo neuronal cortical in vitro con sobreexpresión simultánea de tau y β-amiloide obtenido a partir de un modelo de enfermedad de Alzheimer en ratones triple transgénicos (3xTg-AD o 3xTg) obtenibles mediante el procedimiento detallado en la solicitud internacional WO2003/053136 y proporcionados por los titulares de dicha solicitud, o bien un modelo neuronal cortical in vitro obtenido de ratones no transgénicos (no Tg) . El modelo neuronal triple transgénico presenta sobreexpresión simultánea de los transgenes humanos de presenilina (PS1M146V) , proteína precursora de β-amiloide (APPSwe) y proteína tau (tauP301L) , lo que da lugar a un modelo de Alzheimer con sobreexpresión de β-amiloide e hiperfosforilación de tau.
Los cultivos corticales primarios se obtuvieron a partir de embriones de ratones 3xTg-AD de 15-17 días de gestación y los cultivos silvestres se obtuvieron de embriones de ratones control non 3xTg-AD de la misma cepa. El efecto del compuesto empleado en esta invención sobre la viabilidad celular se realizó mediante un ensayo de fluorescencia empleando el indicador de viabilidad Alamar Blue. Para la realización del ensayo se utilizaron cultivos corticales primarios sembrados en placas de 96 pocillos. Las células neuronales se incubaron con el compuesto de la presente invención, que se disuelve en dimetilsulfóxido (DMSO) , se añade en el medio de cultivo en diferentes concentraciones y se determinó su efecto sobre la viabilidad neuronal a diferentes tiempos de tratamiento in vitro. La concentración máxima de gambierol evaluada in vitro fue de 20 μM y la concentración de alamar blue fue del 10%. El volumen de reacción empleado fue de 200 μl. La fluorescencia se midió a longitudes de onda de 530 nm (excitación) y 590 nm (emisión) . El compuesto objeto de la presente invención no modificó la viabilidad celular in vitro (Tabla 1) .
TABLA 1 Viabilidad de las neuronas corticales después del tratamiento con diferentes concentraciones de gambierol durante 72 horas en cultivo. Los datos son medias ± error estándar de tres experimentos independientes y se expresan como porcentaje respecto del control no tratado con gambierol 
Ejemplo 2
Efecto del gambierol en la sobreexpresión de β-amiloide intracelular y la hiperfosforilación de tau
Para la determinación del efecto del compuesto de la presente invención sobre la expresión de tau y β-amiloide se emplean técnicas de western blot. Los cultivos neuronales primarios se incuban con el compuesto de la presente invención añadido en el medio de cultivo durante un tiempo determinado. En el presente ejemplo los cultivos neuronales primarios son tratados con gambierol 10 μM entre los días 3 y 7 de cultivo. Posteriormente las células se procesan siguiendo los protocolos habituales para western blot. Para los estudios de western blot la expresión proteica se evaluó empleando los anticuerpos primarios anti β-amiloide 6E10 a una dilución 1:500, anti-Tau AT8 (Tau fosforilada en Ser 202, dilución 1:1000) y anti-Tau AT100 (Tau fosforilada en Thr212 y Ser 214, dilución 1:1000) . El anticuerpo anti β-amiloide 6E10 fue obtenido de Covance, y anti-tau AT100 y anti-Tau AT8 fueron suministrados por Thermo Scientific.
Para los ensayos de western blot los cultivos neuronales tratados con el compuesto de la presente invención se lavan con PBS frío y se lisan en tampón Tris-HCl 50 mM (pH 7.4) que contiene NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, 1% Tritón X-100, DTT 2 mM, PMSF 2.5 mM, aprotinina 40 mg/ml, leupeptina 4 mg/ml, NaF 5 mM, Na3VO4 1 mM, 1 mg/ml pepstatina A y 1 mg/ml benzamidina. La concentración proteica total se determina mediante el método de Bradford, empleando albúmina bovina como estándar. Las alícuotas de los lisados celulares conteniendo 20 μg totales de proteína se cargan en tampón de carga (Tris-HCl 50 mM, ditiotreitol 100 mM, 2% SDS, 20% glicerol, 0.05% azul de bromofenol, pH 6.8) , las proteínas se separan mediante electroforesis y se transfieren a membranas de PVDF. Las membranas se incuban con los anticuerpos primarios, se lavan y posteriormente se incuban con un anticuerpo secundario unido a HRP (horseradish peroxidase o peroxidase del rábano) , la inmunoreactividad se detecta mediante quimioluminiscencia. Las mismas membranas se reincuban con un anticuerpo primario anti-β-actina para realizar la corrección de los datos en función del contenido proteico de las muestras. En estos ensayos se demuestra que el tratamiento con gambierol reduce la sobreexpresión de β-amiloide (fig. 1) y de tau fosforilada en el residuo Ser 202 (fig. 2) o en los residuos Thr 212 y Ser 214 (fig. 3) en neuronas obtenidas a partir de ratones triple transgénicos.
Ejemplo 3
Efecto de los compuestos de la presente invención sobre la fosforilación basal de tau en neuronas control
Para la determinación del efecto del gambierol en la fosforilación basal de tau se emplean técnicas de western blot. Se utiliza un modelo neuronal cortical in vitro obtenido de ratones no transgénicos. Los cultivos neuronales, y el procesamiento de muestras se llevan a cabo de la misma forma que en el ejemplo anterior. Los datos obtenidos se corrigen con la cantidad de β-actina en función del contenido proteico de las muestras. En los datos obtenidos se demuestra que el tratamiento de las neuronas control con gambierol no afecta a la cantidad basal de tau total (determinada con el anticuerpo Tau46, que reconoce diferentes isoformas tanto de tau fosforilada como tau no fosforilada, (tabla 2) ni al nivel basal de tau fosforilada en el residuo Ser 202 (tabla 3) .
TABLA 2 Efecto del gambierol sobre los niveles basales de tau total en neuronas control. Los datos son medias ± error estándar de dos experimentos independientes y se expresan como porcentaje respecto al control no tratado 
TABLA 3 Efecto del gambierol sobre los niveles de tau fosforilada en el residuo Ser 202 en neuronas control. Los datos son medias ± error estándar de dos experimentos independientes y se expresan como porcentaje respecto al control no tratado 
Ejemplo 4
Efecto del gambierol en la sobreexpresión de β-amiloide extracelular
Los niveles de β-amiloide extracelular en el medio de cultivo de neuronas corticales obtenidas de ratones triple transgénicos o control tratados con gambierol, se determinan mediante kits de ELISA comerciales para la detección de β-amiloide 1-42 o β-amiloide 1-40 siguiendo las instrucciones recomendadas por el fabricante (Covance) . Estos kits constan de placas tratadas con anticuerpos que capturan el péptido β-amiloide por su extremo amino terminal. Los patrones con cantidades conocidas de β-amiloide, y el medio de cultivo recogido de las preparaciones neuronales con cantidades desconocidas de β-amiloide se añaden a los pocillos y se incuban. Las placas se lavan para eliminar el péptido no unido y se incuban durante 2 horas en presencia de un anticuerpo que se une al extremo carboxilo terminal del péptido β-amiloide. A continuación las placas se lavan y se incuban con un anticuerpo secundario unido a peroxidasa. A los 25 minutos de incubación, las placas se lavan y el sustrato orto-fenilenodiamina (OPD) se añade para visualizar el péptido unido. La densidad óptica se mide por absorbancia a 495 nm, y se obtiene una recta patrón (fig. 4) con las cantidades de β-amiloide añadidas, de la cual se puede extrapolar la cantidad de β-amiloide en el medio de cultivo recogido de las preparaciones neuronales tratadas con los compuestos de la presente invención (fig. 5) .
Todos los procedimientos descritos en la presente invención se puede automatizar para HTS (high-throughput screening) utilizando placas de cultivo a las que previamente se añadieron las células, que fueron cultivadas durante al menos 6 días y sometidas a tratamiento con los compuestos de la presente invención. Estas placas son susceptibles de ser incorporadas a sistemas automáticos de medición de los marcadores que interesen, mediante distintos métodos de medida (absorbancia, luminiscencia, fluorescencia) . De la misma forma, el efecto del compuesto de la presente invención, solo o en combinación con otros agentes en dianas celulares, moleculares y bioquímicas de relevancia para la enfermedad de Alzheimer y/o otras alteraciones neuropatológicas que cursen con alteraciones en la fosforilación de tau o en la expresión de β-amiloide es susceptible de ser investigado mediante métodos de HTS empleando kits comerciales de interés para la evaluación del efecto de estos tratamientos en la evolución de la enfermedad de Alzheimer o enfermedades asociadas a tau y β-amiloide, después de que las células hayan sido sometidas al tratamiento en cuestión.
