Piridotienopirimidinas sustituidas de fórmula general I como antiprotozoarios para acuicultura y procedimiento de preparación.
La presente invención se refiere a la preparación y actividad antiprotozoaria frente al ciliado Philasterides dicentrarchi de pirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidinas de fórmula general I que son útiles como antiprotozoarios en acuicultura, y así son eficaces para el tratamiento de la scuticociliatosis en moluscos, crustáceos y peces,
donde el sustituyente R1 puede ser un grupo arilo, especialmente fenilo con o sin sustituyentes, o un grupo alcoxi (OR) , especialmente con cadena carbonada de 1 hasta 4 carbonos, o un grupo amino mono, di o trisustituido, (NH2, NRH, NRR') , de cadena abierta o cíclica, incluidos los grupos piperidino, morfolino, tiomorfolino y, preferentemente, piperacino; donde el sustituyente Y puede ser hidrógeno (H) o un grupo ciano (CN) ; donde el sustituyente X es un grupo aromático, preferentemente un grupo fenilo con o sin sustitución; y donde el sustituyente R2 es un grupo amino mono, di o trisustituido, (NH2, NRH, NRR') , de cadena abierta o cíclica, incluidos los grupos piperidino, piperacino, morfolino y tiomorfolino y, preferentemente, piperacino.
Entre las enfermedades que mayores daños económicos producen a la acuicultura, debido a la facilidad con la que los agentes patógenos se transmiten en los tanques de circulación cerrada, figura la scuticociliatosis, que es una enfermedad propia de peces crustáceos y moluscos, que afecta tanto a los criados en instalaciones de acuicultura como a los especímenes libres, y que está producida por parásitos ciliados del orden Scuticociliatida tales como Uronema marinum, Uronema nigricans, Anophr y oides haemophila y Mesanophr y s sp (Cheung P. J.; Nigrelli R. F.; Ruggieri D. J. Fish. Dis. 1980, 3, 295-303. Morado J. F.; Small E. B. Reviews in Fisheries Science 1995, 3, 275-354. Cawthorn R.J.; Lynn D.H.; Despres B.; MacMillan R.; Maloney R.; Loughlin M.; Bayer R. Dis. Aquat. Org. 1996, 24, 143-148. Munday B.L.; O'Donoghue P.J.; Watts M.; Rough K.; Hawkesford T. Dis. Aquat. Org. 1997, 30, 17-25) .
En los últimos años se han venido detectando brotes de scuticociliatosis causados por el protozoo Philasterides dicentrarchi causante de gran mortandad en los criaderos de lubina, dentón y rodaballo (Dragesco A.; Dragesco J.; Coste F.; Gasc C.; Romestand B.; Raymond J.; Bouix G. Europ. J. Protistol. 1995, 31, 327-340. Iglesias R.; Paramá A.; Alvarez M.F.; Leiro J.; Fernández J.; Sanmartín M. L. Dis. Aquat. Org. 2001, 46, 47-55. Iglesias R.; Paramá A.; Álvarez M.F.; Leiro J.; Sanmartín M.L. Dis. Aquat. Org. 2002) hasta el punto de constituir una de las parasitosis de mayor incidencia en la acuicultura, responsable de grandes pérdidas económicas, y que permanece sin un tratamiento realmente eficaz, habiéndose demostrado la falta de actividad de muchos fármacos.
Descripción detallada y preparación de las sustancias de formula general I
En esta memoria, por "alcoxi de C1-4" se entiende cualquier radical de cadena lineal o ramificada saturado que contiene oxígeno y de 1 a 4 átomos de carbono, en el que el radical está centrado en el oxígeno. Están incluidos en el alcance de esta expresión los grupos metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, t-butoxi y similares.
Para la preparación de las pirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidinas con estructura general I, donde el sustituyente R1 puede ser un grupo arilo, especialmente fenilo con o sin sustituyentes, o un grupo alcoxi (OR) especialmente con cadena carbonada de 1 hasta 4 carbonos, o un grupo amino mono, di o trisustituido, (NH2, NRH, NRR') , de cadena abierta o cíclica, incluidos los grupos piperidino, morfolino, tiomorfolino y, preferentemente, piperacino; donde el sustituyente Y puede ser hidrógeno (H) o un grupo ciano (CN) ; donde el sustituyente X es un grupo aromático, preferentemente un grupo fenilo con o sin sustitución; y donde el sustituyente R2 es un grupo amino mono, di o trisustituido, (NH2, NRH, NRR') , de cadena abierta o cíclica, incluidos los grupos piperidino, piperacino, morfolino y tiomorfolino y, preferentemente, piperacino, se partió de 3-aminotieno[2, 3-b]piridin-2-carboxamidas que contienen los grupos X, Y y R1 seleccionados (Quintela J.M.; Peinador C.; Veiga C.; González L.; Botana L.; Alfonso A.; Riguera R. Bioorganic Med. Chem., 1998, 6, 1911-1925) y se ciclaron con ortoformiato de etilo para dar las pirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidin-4 (3H) -onas correspondientes, que fueron convertidas en 4-cloro-pirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidinas (fórmula general I, R2 = Cl) con pentacloruro de fósforo y, finalmente, el tratamiento con una variedad de nucleófilos da lugar a la sustitución del cloro y a la introducción del sustituyente R2 y conduce a los compuestos I.
El procedimiento de la invención para la síntesis de las piridotienopirimidina se desarrolla según el siguiente ejemplo:
Ejemplo 1
Preparación de las 8-ciano-7-etoxi-9-fenilpirido [3', 2':4, 5]tieno [3, 2-d]pirimidinas 4-sustituidas.
a) Una solución conteniendo la 3-aminotieno[2, 3-b]piridina-2-carboxamida adecuada (por eje. para R1 = OEt, X = Ph, Y = CN: 3-aminotieno-5-ciano-6-etoxi-7-fenil-[2, 3-b]piridina-2-carboxamida) , (1g, 3 mmol) en 15 mL de ortoformiato de etilo conteniendo una cantidad catalítica de p-TsOH, se refluyeron hasta desaparición del producto de partida. El sólido resultante se filtra y la 8-ciano-7-etoxi-9-fenilpirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidin-4 (3H) -ona resultante se utiliza sin purificación adicional para la etapa siguiente.
b) Una solución conteniendo la 8-ciano-7-etoxi-9-fenilpirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidin-4 (3H) -ona (2.37 mmol) obtenida anteriormente, y pentacloruro de fósforo (3.55 mmol) en oxicloruro de fósforo (6 mL) se refluyó hasta desaparición del producto de partida. Se evaporó a vacío el disolvente y la 4-cloro pirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidina contenida en el residuo sólido se purificó por cromatografia en silica gel.
c) Una solución conteniendo la 4-cloro pirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidina anterior (0.27 mmol) y la amina seleccionada para introducir el grupo R2, (0.32 mmol) en 10 mL de etanol, se refluyó hasta la desaparición del producto de partida. El disolvente se evaporó a vacío y la 8-ciano-7-etoxi-9-fenilpirido[3', 2':4, 5]tieno[3, 2-d]pirimidina 4-sustituida resultante se purificó por cromatografia o por cristalización.
Actividad antiprotozoaria
Los compuestos objeto de la invención son activos frente al protozoo Philasterides dicentrarchi, causante de la scutiliacitosis en peces, moluscos y crustáceos. La actividad fue medida en los ciliados obtenidos de la cavidad natural, mantenidos en condiciones de cultivo que aseguran su capacidad de infección de rodaballo, lubina y otras especies de interés en acuicultura. Los test de actividad se llevaron a cabo en DMSO/PBS y en DMSO/agua de mar, y se expresan en DL (Dosis Letal) : concentración mínima (mg/L) necesaria para la eliminación del 99% de los ciliados.
Los DL obtenidos indican que las piridotieno[3, 2-d]pirimidinas I indicadas aquí, y muy especialmente las que contienen al menos un grupo piperacino como sustituyente del heterociclo, muestran gran actividad antiprotozoaria frente al ciliado Philasterides dicentrarchi. Ejemplo específico de alguno de estos nuevos agentes parasitarios es la piridotienopirimidina 1 (fórmula general I, R1 = OEt, X= fenilo, Y = CN y R2 = piperacino) (DL=12, 5 mg/L) .
La acción inhibidora de liberación de histamina (Quintela J.M.; Peinador C.; Botana L.; Estévez M.; Riguera R. Bioorganic Med. Chem., 1997, 5, 1543-1533. Quintela J.M.; Peinador C.; Veiga C.; González L.; Botana L.; Alfonso A.; Riguera R. Bioorganic Med. Chem., 1998, 6, 1911-1925. Quintela J.M.; Peinador C.; Veiga C.; Botana L.; J Alfonso A.; Riguera R. Eur. J. Med. Chem., 1998, 33, 887-897) y la actividad antiinflamatoria (Quintela J.M.; Peinador C.; González L.; Riguera R.; Rioja I.; Terencio M.C.; Ubeda A.; Alcaraz M. J. J. Med. Chem., 1999, 42, 4720-4724) de algunos de estos compuestos ha sido descrita por los autores de esta invención con anterioridad.
Asimismo, compuestos que poseen el grupo piperacino unido a diversos heterociclos tales como benzoisoquinolinas y nitroimidazoles son conocidos por poseer actividad antiprotozoaria y han sido objeto de patentes anteriores (Wade, P.; Vogt Berthold R.; US Patent 4, 070, 465, 1978. Makovec, F.; Senin, P.;Rovati, L.; Brit.UK Pat. Appl. GB 79-1661719790514, 1979) .
